Hémogramme

 Hémogramme

Données quantitatives et qualitatives

Définition

Hémogramme anciennement dénommé ‘’Numération Formule
Sanguine’’ (NFS) correspond à l’étude quantitative et qualitative
du sang 
Comprend, parmi d’autres, les paramètres suivants :
- Numérations des cellules sanguines
- Dosage de l’hémoglobine
- Mesure et calcul des constantes et indices érythrocytaires et plaquettaires
- Etablissement de la différentielle leucocytaire
-….
Prélèvement


Sur sang veineux en tube sous vide, sous anticoagulant permettant une meilleure conservation des cellules :
>>> EDTA ou Ethylène Diamine Tétra Acétique acide est un
complexon de Ca2+.
>>> Les frottis sanguins doivent être réalisés sans délai
après le prélèvement. 
Sur sang capillaire au bout du doigt (ou au talon chez le
nouveau né) :
>>> Les frottis sanguins peuvent être réalisés sur
prélèvement capillaire.


Données quantitatives de l’hémogramme

Techniques automatiques
 
Paramètres mesurés

Numérations des hématies, des leucocytes et des plaquettes exprimées par mm3 (μl) ou L 
Taux d’hémoglobine par spectrophotométrie à 540 nm par le réactif de Drabkin après lyse des hématies exprimé par g/dl ou g/L.

Courbe de Price Jones : permet le calcul du volume globulaire
moyen et de l’indice de distribution ainsi que la présence d’une
double population.
Volume plaquettaire moyen avec histogramme et indice de
distribution plaquettaire
Histogramme des leucocytes avec différentielle leucocytaire.

Paramètres mesurés de l’hémogramme en techniques automatiques

RDW-CV= (L/VGM)x100 >>> VN : 11,5-14,5%
RDW-DS= largeur du pic à 20% de la population de GR >>> VN : 39-46fl
Indice de distribution érythrocytaire ou Red Cell Distribution Width : RDW

Histogramme des PLT 

Numération des leucocytes

Comptage à partir d'une suspension cellulaire diluée
en liquide hémolytique : taux de dilution 1/200 à
1/300.
Un bac de comptage
Toute particule d'un volume supérieur à 35 fl est comptée comme un leucocyte.

 

La différentielle leucocytaire permet de donner les taux des cellules sanguines en associant plusieurs principes technologiques : La cytométrie et le laser associés à l’impédance ou à la cytochimie

>>> Repérage facilité de populations anormales du sang par des alarmes ou par des mesures spécifiques.

Paramètres calculés 

Hte = Hématocrite
Hte en % = (GR 106/mm3 x VGM en fl ) / 10
TCMH = Teneur corpusculaire moyenne en hémoglogine
TCMH en pg = (Hb g/dl / GR 106/mm3) x 10
CCMH = Concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine.
CCMH en % = (Hb en g/dl / Hte en %) x 100

 Techniques manuelles

Paramètres mesurés en hématimétrie manuelle :
Taux d’hémoglobine par spectrophotométrie à 540 nm par le
réactif de Drabkin après étalonnage et lyse des hématies.
Numérations des hématies, des leucocytes et des plaquettes
réalisées en microscopie sur des cellules de Malassez.
 L’hématocrite est mesuré après centrifugation du sang sur
un tube capillaire : c’est le rapport du volume globulaire sur
le volume du sang total.
Paramètres calculés en hématimétrie manuelle :
VGM : (Hte en % / GR 106/mm3) x 10
TCMH, CCMH idem automates
Données qualitatives de l’hémogramme
Frottis sanguin
Confection manuelle ou automatique des frottis

Données qualitatives de l’hémogramme
 
Frottis sanguin
 
Confection manuelle ou automatique des frottis

Coloration des frottis sanguins
Peut être manuelle ou automatisée.
La coloration combinée de May-Grünwald-Giemsa (MGG), dite
coloration panoptique est la plus utilisée en Europe.
Coloration de Wright est très utilisée aux USA (coloration
automatisée).
 Les deux colorants contiennent en différentes proportions :
 du bleu de méthylène (colorant basique)
 de l’éosine (colorant acide).
 Les structures acidophiles de la cellule seront colorées en rose,
rouge ou orangé.
 Les structures basophiles en bleu : bleu clair, bleu foncé,bleu
violet, pourpre.

Principe de la coloration MGG
 MGG comporte deux colorants :
 May-Grünwald en solution dans du méthanol
 Giemsa.
MGG donne les résultats les plus complets avec les couleurs les
plus brillantes.
 L’alcool utilisé pour dissoudre le colorant de May-Grünwald sert,
en outre, de fixateur.

Morphologie des cellules sanguines en MGG

Globules rouges
 
Sur frottis, les GR ont :
 une forme circulaire
 une taille uniforme avec un diamètre moyen de 8μm
 une coloration gris rosé avec un centre plus clair.

Polynucléaires neutrophiles
 
Sur frottis, les PNN ont :
 une forme arrondie
 un diamètre moyen 12-14μm
 une forme polylobée de leur noyau.
 des granulations
cytoplasmiques fines, de couleur beige rosée (neutrophile).
 Les band cells ou PNN non segmenté.
 Dans le sang normal : 5% environ de band cells

Polynucléaires éosinophiles
 
Sur frottis, les PNE ont :
 une forme arrondie
 un diamètre moyen 12-14μm
 un noyau bilobé.
 des granulations cytoplasmiques sphériques de couleur orangée
(éosinophile).

 

Polynucléaires basophiles
 
Sur frottis, les PNB ont :
 une forme arrondie
 un diamètre moyen 10-14μm
 un noyau bilobé masqué par des granulations cytoplasmiques de
taille hétérogène de couleur pourpre (basophile).

Monocytes
 
Sur frottis, les monocytes ont :
 un diamètre moyen 20-40μm
 un noyau arrondi ou ovalaire, plus souvent réniforme ou irrégulier
 un cytoplasme gris bleuté, avec de fines granulations rosées assez
nombreuses qui se fondent avec le fond cytoplasmique.
 parfois des vacuoles intracytoplasmiques

Lymphocytes
 
Sur frottis, les petits lymphocytes ont :
 un diamètre moyen 7-9μm
 un noyau arrondi ou ovalaire
 un cytoplasme peu étendu clair ou légèrement bleu.
Sur frottis, les grands lymphocytes ont :
 un diamètre moyen 9-15μm
 un noyau central ou légèrement excentré
 un cytoplasme plus étendu entourant le
noyau, hyalin ou légèrement bleu.
>>> des grands lymphocytes peuvent
contenir des grains intracytoplasmiques (3-5
granulations de coloration violacée).

Interprétation de l’hémogramme
 
Résultats quantitatifs
Globules rouges
 La baisse du taux d'hémoglobine définit l‘anémie :
< 13 g/dL chez l'homme
< 11,5 g/dL chez la femme menstruée
< 11 g/dl chez la femme enceinte.
 VGM :
< 80 femtolitre : microcytose
> 80-98 fl : normocytose
> 100 fl : macrocytose.
TCMH et CCMH
TCMH < 27pg et CCMH< 32% : hypochromie
TCMH 27-32pg et CCMH 32-36% : normochromie
 RDW : > 15% : anisocytose.
 Si anémie, taux des réticulocytes :
> 120000/mm3 : définie une anémie régénérative
25000-80000/mm3 : définie une anémie arégénérative

Cas particulier : nouveau né
 
Taux d’Hb 13,5-19,5 g/dl
Hte : 44-64%
VGM : 80-106 fl
RDW : 13-18%
Leucocytes
 
 Taux des leucocytes :
> 10 Giga/L : hyperleucocytose
< 4 G/L : leucopénie
 Taux de PNN
> 8 G/L : polynucléose neutrophile
entre 0,5-1,5 G/L : neutropénie
< 0,3 ou <0,5 G/L : agranulocytose
 Taux des PNE > 0,7 G/L : Hyperéosinophilie
 Taux des lymphocytes
< 1 G/L : lymphopénie
> 4 G/L: hyperlymphocytose
 Taux des monocytes > 1 G/L : monocytose.

Taux sanguin de PNN :
- Nv né 1J: 5-13 giga/l
- Nv né 3J: 1,5-7 giga/l
- Enfant de 6ans: 2-6 giga/l


Plaquettes sanguines
 
 Taux des PLT :
> 500 Giga/L : hyperplaquettose ou hyperthrombocytose
< 150 G/L : Thrombopénie
- En pratique : fausses thrombopénies par présence de
microcaillots constitués lors du prélèvement, ou par agrégation
plaquettaire avec l'EDTA.