L’exploration des plaquettes

L’exploration des plaquettes 

—Numération plaquettaire et hémogramme

ØChiffrer l’importance de la thrombopénie, vérifier l’absence de pseudothrombopénie (EDTA)

ØRechercher l’existence d’autres anomalies de l’hémogramme (anémie, modification quantitative et/ou qualitative des leucocytes) orientant vers une maladie hématologique ou générale

ØEtudier la morphologie des PLT sur lame, leur contenu, leur taille, leur volume moyen (automates,en sachant que la précision est parfois limitée) sur sang EDTA et sur sang citraté ; recherche d’éventuelles inclusions bleutées dans les granulocytes

ØL’examen en microscopie électronique est long et délicat. Il peut permettre de confirmer un déficit en granules alfa ou en granules denses, ou des anomalies des systèmes membranaires dans des cas très précis.

ØL’immunomarquage ultrastructural permet de définir plus précisément la localisation d’un déficit)

 

—L’interrogatoire et un examen clinique attentif

—Quelques tests de dépistage : bilan standard de coagulation (TP, TCA, TT, fibrinogène), temps de saignement

—Hémogramme avec étude quantitative et qualitative des PLT (sur lame)

—Un ou plusieurs examens plus spécialisés  

1.Recherche d’une fragilité capillaire

2.Test d’adhésion plaquettaire

3.Temps d’occlusion in vitro

4.Techniques d’agrégation plaquettaire in vitro

5.Dosage du facteur Willebrand

6.Métabolisme de l’acide arachidonique

7.Microscopie électronique

8.Dosage des divers constituants plaquettaires

9.Etude des glycoprotéines membranaires (biochimie, cytométrie de flux)

10.Quelques tests spécialisés (par exemple pour recherche d’une thrombopénie à l’héparine)

 

Méthodes d’exploration des glycoprotéines plaquettaires

—Diverse méthodes biochimiques sont possibles (électrophorèse uni- ou bidimensionnelle ou croisée, techniques immunochimiques, techniques ELISA, Western blot), souvent très lourdes à mettre en œuvre

—Les techniques de cytométrie de flux permettent, en utilisant un anticorps monoclonal fluorescent, de rechercher ou de quantifier un composant plaquettaire. Sont assez aisément accessibles les Ac contre : GP IIb/IIIa, GP IIIa, GP Ib. On recherchera leur absence dans diverses thrombopathies.

§La recherche d’expression en surface de la sélectine P permet de voir l’état d’activation des PLT

Mise en évidence des anticorps antiplaquettaires dans les thrombopénies immunes

—On recherchera des- iso Ac (patients porteurs d’un déficit constitutionnel en GP, transfusés)

- allo Ac (situation d’incompatibilité)

- auto Ac (situations de dérèglement immunitaire, PTI)

Plusieurs types de techniques, mettant en évidence des Ac fixés sur les plaquettes, ou libres dans le sérum et secondairement fixés sur les plaquettes (tests de Coombs plaquettaires direct et indirect), par techniques cytométriques

—Recherche spécifique de certains Ac : test MAIPA

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Divers

—Le test à la mépacrine : composé fluorescent ajouté à une suspension de PLT, et qui se fixe électivement sur les granules denses (recherche de déficit en granules denses : normalement = 5- 6 par PLT)

—La recherche d’un déficit en granules alfa se fera par microscopie électronique mais aussi par dosage de composants spécifiques de ces granules : PF4 et • thromboglobuline

- Les plaquettes réticulées

—Ce sont des plaquettes circulantes contenant de l’ARN, que l’on met en évidence par la coloration avec le thiazole orange et la mesure au cytomètre de flux. Il s’agit des plaquettes les plus jeunes, équivalent des réticulocytes pour les hématies

Leur nombre peut mesurer indirectement le renouvellement plaquettaire et servir au diagnostic des thrombopénies et au monitorage de sortie d’aplasie : les thrombopénies centrales ayant peu de plaquettes réticulées, à l’inverse des thrombopénies périphériques.

 Les microparticules plaquettaires

—Ce sont des vésicules membranaires de très petite taille (0.2 – 0.8 μm) issues de la fragmentation de la membrane plaquettaire lors de l’activation de celle-ci. Elles possèdent la même organisation que la membrane plaquettaire, et semblent jouer un rôle dans la dissémination de l’activité procoagulante et la stabilisation des agrégats plaquettaires.

—Leur détection ne peut se faire que par cytométrie de flux après marquage membranaire (Ac fluorescent dirigé contre la protéine plaquettaire GP IIb).

—Elles pourraient intervenir dans une approche pronostique de certaines pathologies : risque hémorragique moindre dans un PTI avec des nombreuses microparticules, risque thrombotique élevé dans les thrombocytémies avec microparticules.

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